必赢56net手机版_www.56.net_56net亚洲必赢官网欢迎您!!!

糖摄取、线粒体质量、线粒体膜电位、活性氧流

来源:https://www.wzchild.com 作者:心理学 人气:148 发布时间:2019-01-23
摘要:但在B细胞和T细胞之间以及调节性T细胞亚群内,这些代谢的变化均不相同。例如,小鼠脾脏初始CD4 + T细胞受CD3/CD28刺激后,糖酵解和葡萄糖摄取水平上调,从而表现出糖酵解与OxPhos的比

  但在B细胞和T细胞之间以及调节性T细胞亚群内,这些代谢的变化均不相同。例如,小鼠脾脏初始CD4 + T细胞受CD3/CD28刺激后,糖酵解和葡萄糖摄取水平上调,从而表现出糖酵解与OxPhos的比率增高。相反,B细胞受LPS和抗B细胞受体刺激后,糖酵解和OxPhos均会上调,于是糖酵解/ OxPhos比率与静息B细胞无明显变化。

  另外,细胞代谢过程中,会产生ROS。高水平的ROS可通过直接诱导单链和双链DNA断裂,或通过氧化脂肪酸、蛋白质中的氨基酸或酶促辅因子,来引起细胞氧化应激。然而,在低含量和含氧量正常的条件下,ROS代表重要的细胞信号传导分子。例如,在干细胞中,ROS作为第二信使来确保细胞的再生。

  许多蛋白质是氧化还原传感器。例如,半胱氨酸的氧化使PTEN或Akt失活,这与B细胞发育密切相关;参与抗体类别转换重组的Bach2是一种氧化还原敏感的转录因子。

  因此,免疫细胞代谢包括ROS、糖酵解和线粒体活性,其与信号传导途径交叉,检测免疫细胞的代谢可反映其激活状态,并能预测免疫细胞的命运。

  实时测量糖酵解和线粒体活性的金标准是通过使用Seahorse装置, 然而,这个实验设置需要访问昂贵的设备和大量的细胞(每个实验~2×10E6),并且无法区分亚群。

  可发出荧光的葡萄糖类似物6-NBDG用于直接追踪单糖被细胞摄取的行为。 通过在存在6-NBDG的无葡萄糖培养基中孵育细胞,这种类似物就可以代替葡萄糖积聚在细胞中。 该测定的特异性可以通过竞争性添加葡萄糖来验证。 必须注意的是,该测定不直接测量糖酵解(即丙酮酸或乳酸生产),只能测量葡萄糖摄取。

  这是一种细胞渗透型的羰花青素结构衍生物,是一种亮绿色荧光探针(激发波长490 nm,发射波长516 nm),其在水溶液中几乎不发荧光,只有当聚集在线粒体的脂质环境才能发荧光,并且其定位于线粒体的能力不受线粒体膜电位影响,一旦摄入细胞就不容易被洗涤掉。通过标准化细胞数量、染料浓度和孵育时间,能够实现线粒体质量的半定量检测。

  DIOC6、TMRE这两种染料虽然也能和MitoTracker一样标记线粒体,但与线粒体膜电位密切相关,所以其结合后的荧光强度,反映出线粒体膜电位高低。

  下图为利用TMRE监测线粒体膜电位随时间变化的曲线图,可见经过CCCP处理的阳性对照(绿色曲线),线粒体膜电位随时间快速降低:

  在淋巴细胞中,ROS的主要来源是呼吸链复合物I和III。 荧光染料DCFDA可检测细胞各类ROS,不论其来源。 在细胞内,DCFDA首先脱乙酰化,但不发射荧光直至被ROS氧化成DCF(2α,7β-二氯荧光素)。 值得注意的是,探针虽然对特定的ROS物种没有选择性,但在其他氧化酶和Fe2 +等因子的存在下容易出现。

  下图为DCFDA检测线粒体膜电位的实验结果,红色曲线%过氧二硫酸铵(APS),荧光强度增高,绿色曲线%APS+维生素C还原,使得DCFDA荧光强度重新降低:

  这些强大的功能性指标,再结合细胞表面标记,就可以在复杂细胞群体中,选择出相应的亚群进行代谢指标评估。这样强大的流式,能否吸引你?很可能使你的课题质量上升至少一个档次。

https://www.wzchild.com/xinlixue/65.html

最火资讯